ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在上得到了廣泛的應用，但操作中的各個(gè)環(huán)節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個(gè)環(huán)節常出現問(wèn)題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。下面分析ELISA試驗操作中可能影響結果的原因，并給出相應的解決辦法。
一、選擇試劑
選擇質(zhì)量?jì)?yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
中洪博元實(shí)驗室常用ELISA試劑盒
二、加樣
可能原因：
1）血清或血漿標本分離不好即進(jìn)行加樣；
2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(cháng)(特別是室內溫度較高時(shí))；
3）加完標本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法：
1）標本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。
2)加樣后及時(shí)放入孵箱。
3)加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4)如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5)標本較多時(shí)，請分批操作。
三、孵育
可能原因：
1)孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*；
2)孵育時(shí)間人為延長(cháng)，導致非特異性結合緊附于反應孔周?chē)?，難以清洗*。
解決辦法：
1)貼封片或加蓋；
2)按說(shuō)明步驟嚴格控制操作時(shí)間。
四、洗板
ELISA試劑盒可能原因：
1)采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。
2)采用半自動(dòng)洗板機洗板時(shí)，洗液量不足，導致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導致洗板效果差。
3)反應板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(cháng)。
解決辦法：
1)保證洗液注滿(mǎn)各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；
2)合理安排，或多用幾臺洗板機。
五、顯色
可能原因：
1)顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(cháng)或使用過(guò)期顯色劑；
2)加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。
解決辦法：
1)顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍色的TMB顯色劑不用；
2)加樣時(shí)保持顯色劑不外流；
3)A、B液應避免接觸金屬器械。
六、終止
可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應避免產(chǎn)生氣泡。
七、讀板
如讀板時(shí)板底不清潔等。應保證酶標板清潔。所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標板不接觸次氯酸；盡可能實(shí)現ELISA檢測標準自動(dòng)化，有效提高檢測質(zhì)量。
ELISA試劑盒在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴謹的工作作風(fēng)檢測每一份標本，才能保證檢測質(zhì)量?，F在國內已有相當數量的單位擁有全自動(dòng)酶標儀，這對于實(shí)現ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
