如何解決3D細胞培養(yǎng)板的密閉和污染問題

    3D細胞培養(yǎng)板的加樣和操作：細胞培養(yǎng)板在進行細胞操作時同樣遵循嚴格無菌的原則，各項操作要保證規(guī)范、科學，不對細胞的生長造成額外的影響。這其中zui常見的問題就是如何保證加樣后細胞的均勻和盡量減少換液對細胞生長狀態(tài)的影響。

    1.蓋子很松，屬于半開放培養(yǎng)，這樣的目的是透氣（實際上是為了使培養(yǎng)皿外的co2能夠與培養(yǎng)皿充分交換，維持培養(yǎng)基的pH值）。

    2.凡事有利必有弊，這樣當然增加了污染的可能性。此外這樣還會使培養(yǎng)皿內(nèi)的液體蒸發(fā)，這對于定量的藥物來說就顯得值得注意了。所以以下二條措施是必須的a培養(yǎng)箱內(nèi)空氣必須清潔（定期紫外線照，酒精擦洗，盡量少開關(guān)培養(yǎng)箱）b培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度必須始終保持為100%（培養(yǎng)箱內(nèi)放置無菌蒸餾水的水槽）。

    就好像培養(yǎng)皿，也是一個蓋倒扣的容器，也不會污染。主要是因為蓋子“L”型邊緣產(chǎn)生氣流負壓的緣故，灰塵上面才附著有微生物，而氣流攜帶的灰塵是無法通過產(chǎn)生負壓的蓋邊緣的。而透氣作用只是通過空氣的擴散，不會產(chǎn)生氣流，所以只會透氣不會透菌。

    我使用24孔板，在其中的某些孔中有操作(在超凈臺內(nèi))，而其它孔中還有細胞要培養(yǎng).我很擔心這樣會污染，不知道要注意什么?大家不知道有什么好的建議。

    在超凈臺內(nèi)如果操作規(guī)范的話應(yīng)該可以的，我想你可以充分利用培養(yǎng)版的蓋子，盡量只暴露要操作的孔，將其它孔用蓋子蓋起來。這是我的一點粗淺的見解，拋磚引玉吧！

    使用前綜合考慮一下，充分使用所以的孔；如果只需要使用少數(shù)的孔可以只用一邊的，其余用蓋子蓋住，我習慣于先用右側(cè)的孔（右手加樣方便）。

    其實自己感覺只要注意無菌操作，一般是不會污染的。操作時用幾塊玻片把板子一側(cè)墊高，不要把蓋子全打開，一般沒問題。